SPE回收率遠(yuǎn)超100%？四大原因與精準(zhǔn)排查指南

更新時(shí)間：2025-10-20

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在進(jìn)行SPE（固相萃取）方法開發(fā)或日常檢測時(shí)，我們常常緊盯回收率是否“達(dá)標(biāo)”。當(dāng)回收率低于預(yù)期，我們會(huì)自然地想到是提取過程有損失。但當(dāng)回收率“爆表”，遠(yuǎn)超100%時(shí)，許多分析人員反而會(huì)感到困惑：多出來的部分是從哪來的？

誠然，如許多技術(shù)指南所指出的，SPE操作中的問題是常見誘因。但更重要的是，我們需要建立一個(gè)更全面的認(rèn)知：回收率 > 100%是分析方法存在“正向系統(tǒng)偏差”的信號(hào)，而這偏差可能來源于整個(gè)分析流程的多個(gè)環(huán)節(jié)。

需要明確的是，在方法驗(yàn)證所規(guī)定的允許范圍內(nèi)，微小的正向偏差是分析方法本身固有的、可以接受的合理波動(dòng)；只有當(dāng)回收率持續(xù)且顯著地超出標(biāo)準(zhǔn)或規(guī)范范圍時(shí)，才意味著系統(tǒng)可能存在異常，需要進(jìn)行我們下文所詳述的系統(tǒng)性排查。

01 共洗脫干擾物：基質(zhì)里的“隱形干擾者”

問題根源

樣品基質(zhì)中可能存在一些雜質(zhì)，SPE的核心目標(biāo)之一就是去除它們。但如果這些雜質(zhì)未能被有效分離，就會(huì)與目標(biāo)分析物一起被洗脫（即“共洗脫”）。在后續(xù)的色譜或質(zhì)譜分析中，這些干擾物可能：產(chǎn)生與目標(biāo)物重疊或難以分辨的色譜峰，導(dǎo)致積分面積偏大；或通過基質(zhì)效應(yīng)增強(qiáng)目標(biāo)物的離子化效率，使質(zhì)譜儀器檢測到的信號(hào)高于實(shí)際值。

解決方案

● 優(yōu)化洗滌步驟：調(diào)整SPE方法中的洗滌溶劑種類、濃度或體積，讓雜質(zhì)在洗滌階段被選擇性去除，只留下目標(biāo)分析物吸附在填料上。

● 換用更合適的吸附劑：如果當(dāng)前吸附劑選擇性不足，可考慮更換為選擇性更強(qiáng)的吸附劑。例如，若分析物或雜質(zhì)可電離，采用離子交換吸附劑通常能獲得比反相吸附劑更純凈的提取物。

● 調(diào)整分析方法：如果雜質(zhì)和目標(biāo)分析物的色譜峰能分開，也可以不改動(dòng)SPE步驟，直接優(yōu)化后續(xù)檢測方法（如調(diào)整流動(dòng)相、柱溫），使兩者的峰分離，避免干擾。

● 空白扣除：平行處理一個(gè)空白樣品，確定干擾物的本底值，并在計(jì)算最終結(jié)果時(shí)將此空白值扣除。

02 溶劑/吸附劑污染：源頭把控不足

問題根源

有時(shí)，干擾物并非來自樣品基質(zhì)，而是來自SPE實(shí)驗(yàn)的“源頭材料”——例如洗脫用的溶劑本身含有微量雜質(zhì)，或SPE柱的吸附劑在生產(chǎn)、儲(chǔ)存過程中殘留了一些與目標(biāo)化合物性質(zhì)相似的物質(zhì)。這些污染物會(huì)與分析物一起被洗脫，導(dǎo)致檢測結(jié)果偏高。

解決方案

● 預(yù)清洗吸附劑：在上樣前，使用足量的洗脫溶劑對(duì)SPE柱進(jìn)行預(yù)平衡和清洗，以沖走吸附劑中大部分潛在污染物。

● 空白運(yùn)行校準(zhǔn)：單獨(dú)用“空白SPE柱 + 洗脫溶劑”進(jìn)行一次實(shí)驗(yàn)（不加載樣品），檢測其中是否有污染物。計(jì)算回收率時(shí)，從目標(biāo)峰的信號(hào)中減去這個(gè)空白污染信號(hào)，以消除干擾。

● 更換溶劑品牌或批次：如果確認(rèn)是溶劑帶來的污染，直接更換純度更高的溶劑（如從分析純升級(jí)為色譜純），或更換另一批次的溶劑，通常能解決問題。

03 內(nèi)標(biāo)異常：參考點(diǎn)“失準(zhǔn)”

問題根源

內(nèi)標(biāo)是計(jì)算回收率的“基準(zhǔn)”。如果內(nèi)標(biāo)的回收率不穩(wěn)定或顯著低于100%（例如內(nèi)標(biāo)未能很好地從SPE吸附劑上洗脫，或在實(shí)驗(yàn)過程中被降解），那么以它作為基準(zhǔn)進(jìn)行校正時(shí)，就會(huì)系統(tǒng)性地計(jì)算出偏高的目標(biāo)物回收率。

解決方案

● 選對(duì)內(nèi)標(biāo)：優(yōu)先選擇與目標(biāo)化合物“性質(zhì)相似”的內(nèi)標(biāo)（如結(jié)構(gòu)類似、極性相近、保留行為一致），這樣內(nèi)標(biāo)的回收率能更貼近目標(biāo)分析物，提供更可靠的參考。

● 監(jiān)控內(nèi)標(biāo)行為：密切關(guān)注內(nèi)標(biāo)本身的響應(yīng)和回收率，如果其回收率不理想，則該批次定量結(jié)果的可信度存疑。

● 考慮替代方案：如果內(nèi)標(biāo)法無法穩(wěn)定建立，可嘗試使用在樣品提取完成后、上機(jī)前加入的外標(biāo)來計(jì)算絕對(duì)回收率，作為方法評(píng)估的參考。

04 回收率計(jì)算不準(zhǔn)確：細(xì)節(jié)出錯(cuò)

問題根源

有時(shí)問題并非出在實(shí)驗(yàn)操作，而是出在“計(jì)算環(huán)節(jié)”——例如稀釋因子漏算、色譜峰積分錯(cuò)誤，或分析方法本身存在漏洞，這些都會(huì)導(dǎo)致最終的回收率結(jié)果虛高。

解決方案

● 核查計(jì)算過程：重新檢查所有計(jì)算公式，重點(diǎn)確認(rèn)稀釋因子（如樣品加載前的稀釋、洗脫后的定容稀釋）是否全部計(jì)入，避免因漏算導(dǎo)致結(jié)果偏大。

● 審查積分參數(shù)：重新檢查色譜圖的積分基線和峰識(shí)別設(shè)置。不恰當(dāng)?shù)氖謩?dòng)或自動(dòng)積分是導(dǎo)致峰面積不準(zhǔn)的常見原因。

● 驗(yàn)證分析方法：確保儀器方法處于最佳狀態(tài)，校準(zhǔn)曲線線性良好，并且進(jìn)樣溶劑強(qiáng)度不會(huì)引起峰形畸變。

總結(jié)與排查步驟

遇到回收率遠(yuǎn)超100%時(shí)，建議按以下步驟系統(tǒng)排查：

先做空白驗(yàn)證（空白樣品 / 空白SPE + 溶劑），排除基質(zhì)雜質(zhì)和源頭污染；
檢查內(nèi)標(biāo)回收率，確認(rèn)參考基準(zhǔn)是否可靠；
核查計(jì)算和積分，避免細(xì)節(jié)錯(cuò)誤；
根據(jù)排查結(jié)果，針對(duì)性調(diào)整SPE方法或分析方法。

SPE回收率超100%并不可怕，只要找準(zhǔn)原因，逐步優(yōu)化，就能獲得準(zhǔn)確的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。如果您在實(shí)驗(yàn)中還遇到其他問題，歡迎留言，我們一起交流探討！