1.樣品準(zhǔn)備與預(yù)處理
-確保待測(cè)樣品溶解良好且無(wú)顆粒雜質(zhì),必要時(shí)進(jìn)行過(guò)濾或離心處理,以防止堵塞流路。
-根據(jù)目標(biāo)組分的性質(zhì)選擇合適的溶劑體系,并調(diào)整至適宜濃度。
2.系統(tǒng)初始化與參數(shù)設(shè)置
-開(kāi)啟電源后檢查各模塊(如高壓泵、檢測(cè)器、餾分收集器)是否正常連接,并通過(guò)控制軟件進(jìn)行自檢程序。
-設(shè)定流動(dòng)相比例、流速及梯度洗脫方案,同時(shí)配置檢測(cè)波長(zhǎng)等參數(shù)以匹配目標(biāo)物的吸收特性。
3.裝柱與平衡系統(tǒng)
-安裝適配規(guī)格的色譜柱(如5μm或10μm粒徑填料),并確保密封性良好;隨后用初始流動(dòng)相充分平衡柱子直至基線穩(wěn)定。
4.進(jìn)樣與分離過(guò)程監(jiān)控
-通過(guò)手動(dòng)注射器或自動(dòng)進(jìn)樣器引入樣品,啟動(dòng)運(yùn)行程序;實(shí)時(shí)觀察壓力變化曲線和色譜圖,確認(rèn)分離效果是否符合預(yù)期。
5.目標(biāo)餾分收集
-根據(jù)峰型判斷目標(biāo)組分流出時(shí)間,利用餾分收集器按設(shè)定區(qū)間分段接收產(chǎn)物;若搭載自動(dòng)化功能,可預(yù)設(shè)觸發(fā)條件實(shí)現(xiàn)準(zhǔn)確截取。
6.后處理與數(shù)據(jù)分析
-實(shí)驗(yàn)結(jié)束后依次用高/低極性溶劑沖洗管路及柱子,避免殘留物累積;導(dǎo)出數(shù)據(jù)并結(jié)合標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)照完成定量分析。
高壓制備色譜系統(tǒng)優(yōu)點(diǎn):
1.高效性與高產(chǎn)率:高壓條件下,流動(dòng)相動(dòng)能增強(qiáng),樣品處理通量大幅提升。例如某些系統(tǒng)的梯度流量可達(dá)800ml/min,且支持大尺寸制備柱,單次運(yùn)行即可獲得較多量的高純度物質(zhì)。此外,自動(dòng)化連續(xù)進(jìn)樣設(shè)計(jì)減少了人工干預(yù),特別適用于大規(guī)模生產(chǎn)場(chǎng)景。
2.靈活性與兼容性:可適配不同粒徑的填料和多種規(guī)格的色譜柱,既能完成粗分也能進(jìn)行精細(xì)純化。這種多功能性使其在藥物合成中間體純化、多肽分離等領(lǐng)域具有廣泛應(yīng)用價(jià)值。
3.準(zhǔn)確調(diào)控與穩(wěn)定性:先進(jìn)的恒溫控制模塊有效降低溫度波動(dòng)對(duì)結(jié)果的影響;而權(quán)限管理和審計(jì)追蹤體系則保障了實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的可追溯性與合規(guī)性。
4.適用性廣泛:從實(shí)驗(yàn)室小規(guī)模制備到工業(yè)生產(chǎn)放大,高壓制備色譜均展現(xiàn)出優(yōu)異的適應(yīng)性。其穩(wěn)健的性能尤其適合處理復(fù)雜樣品體系,為科研創(chuàng)新提供有力支撐。