紐甜,又名N-[N-(3,3一二甲基丁基)-L-α-天門冬氨]-L-苯丙氨酸-1-甲酯,是一種白色結晶粉末,含約4.5%的結晶水,是一種功能性甜味劑。紐甜具有純正的甜味,十分接近阿斯巴甜,沒有其他強力甜味劑常帶的苦味和金屬味,甜度比蔗糖甜7000~13000倍,比阿斯巴甜甜30~60倍但是能量值幾乎為零,此外它還可以在瞬時高溫的條件下保持穩定,例如在蛋糕生產中,經過4500℃的高溫焙烤后,仍有85%的紐甜存在,是比較穩定的甜味劑,綜上,在許多食品的生產中,紐甜發揮著重要作用。
GB 5009.247-2025 食品安全國家標準食品中紐甜的測定標準在2025年進行了更新,廣泛用于食品相關的紐甜檢測。具體有哪些值得關注的知識點呢?讓我們跟隨飛諾美的實驗方案來看一看。
?稱量:稱取5g(精確至0.01g)果凍試樣于50mL離心管中,加標;
?提取:加入25mL混合提取液,于60℃水浴振蕩 30min至樣品溶化。冷卻至室溫,測溶液PH在4.5左右,不需調節PH,超聲30min。加入1mL 亞鐵氰化甲溶液(92g/L)和1mL乙酸鋅溶液(183g/L)渦旋混勻,4000r/min離心5min。上清液轉移至50mL容量瓶中。殘渣加入20mL混合提取液,振蕩5min,4000r/min離心5min,合并上清液,用混合提取液定容至刻度,待凈化;
?活化:Cleanert PEP小柱依次用6mL甲醇、6mL 水活化,保持柱體濕潤;
?上樣:準確將10.0mL樣液上樣過柱;
?淋洗:用5.0mL 甲醇-三乙胺緩沖液淋洗小柱,真空抽干10min;
?洗脫:8.0mL混合洗脫液洗脫小柱,抽干;收集洗脫液于60℃氮吹濃縮至約1mL,用甲酸-三乙胺緩沖液定容至2.0mL,過0.45μm 尼龍濾膜,上機待測。
?稱量:稱取5g(精確至0.01g)沙拉醬試樣于 50mL離心管中,加標;
?提取:加入25mL混合提取液,于60℃水浴振蕩 30min。冷卻至室溫,加5mL正己烷,振蕩 5min,4000r/min離心5min,棄去正己烷層。測溶液PH在4.5左右,不需調節PH,超聲30min。 加入1mL亞鐵氰化鉀溶液(92g/L)和1mL乙酸鋅溶液(183g/L)渦旋混勻,4000r/min離心 5min。上清液轉移至50mL容量瓶中。殘渣加入 20mL混合提取液,振蕩5min,4000r/min離心 5min,合并上清液,用混合提取液定容至刻度,待凈化;
?活化:Cleanert PEP小柱依次用6mL甲醇、6mL 水活化,保持柱體濕潤;
?上樣:準確將 10.0mL樣液上樣過柱;
?淋洗:用 5.0mL 甲醇-三乙胺緩沖液淋洗小柱,真空抽干10min;
?洗脫:8.0mL混合洗脫液洗脫小柱,抽干;收集洗脫液于60℃氮吹濃縮至約1mL,用甲酸-三乙胺緩沖液定容至2.0mL,過0.45μm 尼龍濾膜,上機待測。
?色譜柱:Kinetex C18,4.6×150mm,5µm;
?流動相:A:乙酸銨溶液(20mmol/L),B:甲醇;
?流 速:1.0 mL/min;
?柱 溫:25 ℃;
?進樣量:10 μL;
?梯度洗脫:
實驗選擇4.8mg/kg濃度添加計算回收率結果,平行6組,基質添加濃度的回收率≥90%,RSD<1%。
果凍樣品色譜圖(紐甜理論添加濃度4.8mg/kg)
沙拉醬樣品色譜圖(紐甜理論添加濃度 4.8mg/kg)
本實驗重現了GB5009.247-2025 食品安全國家標準 食品中紐甜的測定,使用Cleanert PEP結合液相色譜的檢測方法對果凍、沙拉醬等基質進行了紐甜的測試。試樣用混合提取液提取,含膠基試樣經水浴溶解、高脂肪試樣經正己烷脫脂,蛋白沉淀劑沉淀蛋白,Cleanert PEP, 500mg/6mL(PE5006)固相萃取柱凈化,Kinetex C18,4.6×150mm,5μm ( 00F-4601-E0) 液相色譜柱進行檢測,采用外標法定量。結果表明,添加水平的相對回收率均≥90%,RSD均<1%,能夠滿足檢測要求。值得注意的是,樣品經混合提取液提取后測量PH值,若在PH 4.5左右可以省去甲酸或氨水(20%)調節PH這一步驟以提高實驗效率。